马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)海藻糖代谢和几丁质合成相关基因的克隆与功能分析

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马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)海藻糖代谢和几丁质合成相关基因的克隆与功能分析
论文目录
 
摘要第1-11页
ABSTRACT第11-15页
中英文缩略词第15-18页
第一章 文献综述第18-38页
  1.1 糖代谢概述第18-19页
  1.2 昆虫重要的糖类第19页
  1.3 海藻糖简介第19-23页
    1.3.1 海藻糖代谢第20-21页
    1.3.2 昆虫海藻糖的功能第21-23页
  1.4 几丁质简介第23-33页
    1.4.1 几丁质合成第24-26页
    1.4.2 几丁质的沉积与降解第26-28页
    1.4.3 几丁质的功能第28-33页
  1.5 昆虫激素对糖代谢的调控第33-35页
    1.5.1 蜕皮激素诱导糖代谢基因的转录第34页
    1.5.2 保幼激素对糖代谢基因转录水平的调控第34-35页
  1.6 本研究的目的和意义第35-38页
第二章 马铃薯甲虫糖类和脂类代谢基因的克隆及其对激素信号的响应第38-84页
  2.1 材料与方法第39-49页
    2.1.1 供试昆虫第39页
    2.1.2 主要试剂与仪器第39-40页
    2.1.3 基因全长的获得第40-46页
    2.1.4 dsRNA合成第46页
    2.1.5 生物测定第46-47页
    2.1.6 中肠孵育第47页
    2.1.7 20E与JH的定量分析第47页
    2.1.8 实时荧光定量PCR第47-48页
    2.1.9 统计分析第48-49页
  2.2 结果与分析第49-79页
    2.2.1 糖代谢基因的克隆第49-64页
    2.2.2 糖代谢基因的龄期表达第64-66页
    2.2.3 昆虫激素调控海藻糖代谢基因的转录第66-72页
    2.2.4 昆虫激素对LdUAP和LdChS转录水平的影响第72-79页
  2.3 讨论第79-84页
    2.3.1 马铃薯甲虫糖类和脂类代谢基因的克隆第79-80页
    2.3.2 马铃薯甲虫幼虫20E和JH调控LdUAP的转录水平第80页
    2.3.3 昆虫激素通过海藻糖代谢和几丁质合成关键基因的转录调控昆虫的生命进程第80-84页
第三章 海藻糖的代谢第84-118页
  3.1 材料与方法第86-89页
    3.1.1 马铃薯甲虫饲养与化合物第86页
    3.1.2 dsRNA的准备第86页
    3.1.3 生物测定第86-87页
    3.1.4 qRT-PCR第87页
    3.1.5 海藻糖酶活测量第87页
    3.1.6 海藻糖,葡萄糖和糖原含量分析第87-88页
    3.1.7 中间代谢产物分析第88页
    3.1.8 三磷酸腺苷(ATP)分析第88页
    3.1.9 游离氨基酸分析第88-89页
    3.1.10 几丁质分析第89页
    3.1.11 数据分析第89页
  3.2 结果与分析第89-112页
    3.2.1 海藻糖代谢基因的组织表达第89-90页
    3.2.2 敲低LdTPS或LdTRE对马铃薯甲虫幼虫的影响第90-94页
    3.2.3 敲低LdTPS和LdTRE对马铃薯甲虫幼虫海藻糖、葡萄糖和糖原含量的影响第94-99页
    3.2.4 敲低LdTPS和LdTRE对马铃薯甲虫幼虫糖代谢中间产物的影响第99-103页
    3.2.5 敲低LdTPS和LdTRE对马铃薯甲虫幼虫脂肪的影响第103-105页
    3.2.6 敲低LdTPS和LdTRE对马铃薯幼虫游离氨基酸的影响第105-107页
    3.2.7 敲低LdTPS和LdTRE对马铃薯幼虫几丁质的影响第107-109页
    3.2.8 喂食海藻糖和葡萄糖对敲低LdTPS或LdTRE的幼虫的回补效应第109-112页
  3.3 讨论第112-118页
    3.3.1 幼虫血淋巴中的海藻糖含量参与取食调控第112-113页
    3.3.2 海藻糖的合成减少血淋巴中碳水化合物的含量,是促进单糖吸收的途径之一第113-114页
    3.3.3 3个LdTRE基因编码的酶在不同组织降解海藻糖第114-115页
    3.3.4 海藻糖是马铃薯甲虫幼虫几丁质合成的底物第115-118页
第四章 几丁质的合成第118-142页
  4.1 材料与方法第119-121页
    4.1.1 马铃薯甲虫饲养第119页
    4.1.2 dsRNA的准备第119-120页
    4.1.3 生物测定第120页
    4.1.4 几丁质含量分析第120页
    4.1.5 中肠和气管的完整性分析第120-121页
    4.1.6 qRT-PCR第121页
    4.1.7 数据分析第121页
  4.2 结果与分析第121-137页
    4.2.1 LdUAP和LdChS的组织表达第121-123页
    4.2.2 dsUAPs和dsChSs对靶标基因的沉默效应第123-124页
    4.2.3 二龄幼虫取食dsUAP和dsChS对马铃薯甲虫的影响第124-129页
    4.2.4 沉默LdUAP和LdChS对马铃薯甲虫几丁质含量的影响第129-130页
    4.2.5 沉默LdUAP和LdChS对马铃薯甲虫幼虫气管和中肠围食膜的影响第130-133页
    4.2.6 四龄幼虫取食dsUAP和dsChS对马铃薯甲虫生长发育的影响第133-137页
  4.3 讨论第137-142页
    4.3.1 马铃薯甲虫幼虫LdUAP和LdChS的表达第137-138页
    4.3.2 LdUAP1和LdChSA负责外胚层起源的表皮细胞几丁质合成第138-139页
    4.3.3 LdUAP2和LdShSB负责中肠围食膜几丁质的合成第139页
    4.3.4 马铃薯甲虫幼虫的RNA干扰效率具有发育阶段依赖性第139-142页
第五章 糖代谢与雌虫生殖第142-162页
  5.1 材料与方法第143-145页
    5.1.1 马铃薯甲虫饲养第143页
    5.1.2 dsRNA的准备第143-144页
    5.1.3 生物测定第144页
    5.1.4 qRT-PCR第144页
    5.1.5 海藻糖,葡萄糖含量分析第144-145页
    5.1.6 产卵统计第145页
    5.1.7 卵巢表型第145页
    5.1.8 数据分析第145页
  5.2 结果与分析第145-159页
    5.2.1 LdTPS和LdTRE的表达第145-148页
    5.2.2 分别喂食dsTPS、dsTRE1a和dsTRE2对雌虫的影响第148-150页
    5.2.3 dsTPS、dsTRE对马铃薯甲虫雌虫卵形成的影响第150-151页
    5.2.4 敲低LdTPS、LdTRE对马铃薯甲虫雌虫类胰岛素、卵黄原蛋白和几丁质合成相关基因转录的影响第151-153页
    5.2.5 LdUAP和LdChS的时空表达第153-155页
    5.2.6 敲低LdUAP和LdChS对雌虫发育和产卵的影响第155-156页
    5.2.7 敲低LdUAP、LdChS对雌虫卵巢结构和卵形成的影响第156-157页
    5.2.8 敲低LdUAP、LdChS对类胰岛素和卵黄原蛋白基因转录的影响第157-159页
  5.3 讨论第159-162页
    5.3.1 糖代谢基因的表达第159页
    5.3.2 海藻糖为卵子发生提供能量和基质第159-160页
    5.3.3 破坏几丁质结构影响雌虫卵巢结构和卵子发生第160-162页
全文总结第162-164页
参考文献第164-182页
附录第182-194页
致谢第194-196页
攻读博士学位期间发表的学术论文目录第196页

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